實(shí)驗(yàn)大小鼠心臟固定方法的優(yōu)化
2023.04.27目的 對(duì)于活體狀態(tài)下持續(xù)進(jìn)行舒張收縮的組織(如心臟),利用傳統(tǒng)的組織固定方法,存在多種問 題,本研究從動(dòng)物心臟取材流程到氯化鉀終止?jié)舛燃俺绦虻倪x擇進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià),并與傳統(tǒng)固定方式及主動(dòng)灌流 固定方式對(duì)比分析,從而優(yōu)化大小鼠等小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟組織的取材及固定方法。
方法 首先對(duì)心室內(nèi)原位注射 KCl 溶液及摘取心臟后轉(zhuǎn)置 KCl 溶液,這兩種取材制備流程進(jìn)行對(duì)比分析,隨后從心臟在體形態(tài)還原度、舒張期終 止一致性、模型成功率、心肌顯微形態(tài)及在特染中的應(yīng)用,對(duì)傳統(tǒng)固定方式、主動(dòng)灌注固定方式及 KCl 終止法這三 種方式進(jìn)行系統(tǒng)性比較。
結(jié)果 傳統(tǒng)被動(dòng)固定法,制備的心臟整體形態(tài)不規(guī)則,部分樣本心室塌陷,心臟明顯皺 縮,心室腔內(nèi)及心肌血管內(nèi)有明顯血液存積,因停搏期不一致,個(gè)體間形態(tài)差異較大。 主動(dòng)灌注法,心臟整體尺寸 顯著增大,雙室擴(kuò)張嚴(yán)重,肌纖維發(fā)生斷裂,顯微結(jié)構(gòu)受破壞。 而 KCl 終止法,心臟整體形態(tài)完整,心臟無(wú)明顯皺 縮,停搏期較為一致,且制備樣本組內(nèi)個(gè)體間差異小。
結(jié)論 本文改進(jìn)的 KCl 終止法于心臟在體形態(tài)還原度及后 續(xù)病理組織學(xué)染色分析方面皆優(yōu)于傳統(tǒng)被動(dòng)固定法及主動(dòng)灌注法。 該法為心臟病理組織學(xué)相關(guān)研究,提供組織固 定的方法學(xué)參考,同時(shí),不同個(gè)體間心臟組織形態(tài)分析的一致性和在體還原度的提高,對(duì)動(dòng)物模型心臟內(nèi)部精細(xì)結(jié) 構(gòu),如左右心室、左右心房、室間隔、乳頭肌、瓣膜等的觀察分析,具有重要意義。
